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本试剂盒基于LAMP-OTG变色扩增技术，为冻干制品相对于市面上的液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30分钟内完成检测。试剂盒含Bst4.0 DNA聚合酶，既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

橙绿变色染料OTG以冻干的形式预加在8联管盖上。在LAMP反应完毕后（在反应完毕前，务必不能将管盖上染料混入反应液中），将0.2mL EP管颠倒溶解OTG染料后。LAMP的反应产物将与OTG染料形成强烈的绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未发生扩增的EP管为深橙色（阴性）。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。LAMP检测方法分为多种，包括染料法、浊度法、电泳法及的TaqMan荧光探针法。

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP检测实验。

• LAMP OTG Reagent为干粉形式，包含Bst 4.0 DNA聚合酶、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75mL的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
  
• OTG染料已经预先加入在EP管盖上，为干粉形式，其牢固的结合在管盖上，仅有反应完毕后，将EP管倒置后才能将其溶解，溶解后其将立即终止LAMP反应，并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中，否则会导致LAMP反应终止。
  
• 按下表在0.2mL EP反应管中加入各成分配制反应体系
  

  成分	用量
  溶解后的LAMP OTG Reagent	15μL
  LAMP Primer Mix	1μL、1.5μL或2μL
  模板DNA或RNA	1μL
  ddH2O	至20μL

  
  注：
  ① 全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上含OTG染料的EP管盖（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。
  ② 首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μL，以阴性不变色，阳性样品正常变色为标准，作为后续测试用量。
  
• 反应体系配好后，置于60～65℃（首次实验采用60℃）进行反应20～45min（扩增良好的引物组合，通常25min即可变色，一般不超过45min，首次实验设置20、25、30、45min）。
  
• 观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置30s。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。（在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染）。一旦发生气溶胶污染，请使用百奥莱博公司的DNA污染去除剂（货号：MT3001）进行环境清理。

• LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为8μM、F3/B3分别为2μM。
  
• 四个重要的参数，将对成功建立LAMP检测方法至关重要，分别是：引物位置；引物使用浓度；反应温度；反应时间。引物使用浓度、反应温度、反应时间是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。